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一、知識(shí)歸納

1．與DNA分子相關(guān)的酶

名稱(chēng)

作用

參與的生理過(guò)程應(yīng)用

限制性核酸內(nèi)切酶

切割某種特定的脫氧核苷酸序列

基因工程

DNA連接酶

連接兩個(gè)DNA片段

基因工程

DNA聚合酶

在脫氧核苷酸鏈上添加單個(gè)脫氧酸

DNA復(fù)制

RNA聚合酶

在核苷酸鏈上添加單個(gè)核糖核苷酸

轉(zhuǎn)錄

解旋酶

使堿基間氫鍵斷裂

DNA復(fù)制及轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄酶

以RNA為模板合成DNA

逆轉(zhuǎn)錄及基因工程

特別注意：

（1）限制性核酸內(nèi)切酶的來(lái)源：多數(shù)來(lái)自原核生物；作用特點(diǎn)：主要切割外源DNA，對(duì)自身的DNA不起作用從而達(dá)到保護(hù)自身的目的；作用結(jié)果：形成DNA片斷末端。

（2）各種酶都具有專(zhuān)一性，特別是限制酶只能識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列，并在特定的堿基之間切開(kāi)。

2．基因工程的基本操作程序

（1）獲取目的基因

①基因文庫(kù)：是將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中通過(guò)克隆而儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。

②基因組文庫(kù)：基因文庫(kù)中含有一種生物所有的基因就叫做基因組文庫(kù)。

③部分基因文庫(kù)：含有一種生物的部分基因，就叫做部分基因文庫(kù)，如cDNA文庫(kù)。

PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較

比較項(xiàng)目

PCR技術(shù)

DNA復(fù)制

相同點(diǎn)

原理

DNA雙鏈復(fù)制（（堿基互補(bǔ)配對(duì)）

原料

四種游離的脫氧核苷酸

條件

模板、ATP、酶等

不同點(diǎn)

解旋方式

DNA在高溫下變性解旋

解旋酶催化

場(chǎng)所

體外復(fù)制

主要在細(xì)胞核內(nèi)

酶

熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（Taq酶）

細(xì)胞內(nèi)含有的DNA聚合酶

結(jié)果

在短時(shí)間內(nèi)形成大量的DNA片段

形成整個(gè)DNA分子

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建（基因工程的核心）

①構(gòu)建目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

②一個(gè)基因表達(dá)載體的組成：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等。

③構(gòu)建方法

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞—轉(zhuǎn)化

生物種類(lèi)

植物細(xì)胞

動(dòng)物細(xì)胞

微生物細(xì)胞

常用方法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

顯微注射技術(shù)

Ca2+處理法

受體細(xì)胞

體細(xì)胞

受精卵

原核細(xì)胞

轉(zhuǎn)化過(guò)程

將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T­DNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的DNA→表達(dá)

將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物

Ca2+處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子

特別注意：受體細(xì)胞中常用植物受精卵或體細(xì)胞（經(jīng)組織培養(yǎng)）、動(dòng)物受精卵（一般不用體細(xì)胞）、微生物──大腸桿菌、酵母菌等，但要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素則必需用真核生物酵母菌──需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌。一般不用支原體，原因是它營(yíng)寄生生活；一定不能用哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞，原因是它無(wú)細(xì)胞核和眾多的細(xì)胞器，不能合成蛋白質(zhì)。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定

3．基因工程和蛋白質(zhì)工程比較

比較項(xiàng)目

基因工程

蛋白質(zhì)工程

原理

基因重組

中心法則的逆轉(zhuǎn)

區(qū)別

過(guò)程

獲取目的基因→構(gòu)建表達(dá)載體→導(dǎo)入受體細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定

預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)氨基酸序列→合成DNA→表達(dá)出蛋白質(zhì)

實(shí)質(zhì)

定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類(lèi)所需要的生物類(lèi)型或生物產(chǎn)品（基因的異體表達(dá)）

定向改造或生產(chǎn)人類(lèi)所需要的蛋白質(zhì)

結(jié)果

生產(chǎn)自然界中已經(jīng)有的蛋白質(zhì)

生產(chǎn)自然界中沒(méi)有的蛋白質(zhì)

聯(lián)系

蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)的改造或制造新的蛋白質(zhì)必須通過(guò)基因修飾或基因合成來(lái)實(shí)現(xiàn)

二、相關(guān)試題

1．下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是　　（　　　　）

A．目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物

B．限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶

C．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性

D．載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)

2．下表有關(guān)基因表達(dá)的選項(xiàng)中，不可能的是　　（　　　　）

基因

表達(dá)的的細(xì)胞

表達(dá)產(chǎn)物

A

細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因

抗蟲(chóng)棉葉肉細(xì)胞

細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白

B

人酪氨酸酶基因

正常人皮膚細(xì)胞

人酪氨酸酶

C

動(dòng)物胰島素基因

大腸桿菌工程菌細(xì)胞

動(dòng)物胰島素

D

兔血紅蛋白基因

兔成熟紅細(xì)胞

兔血紅蛋白

3．下列敘述符合基因工程概念的是　　（　　　　）

A．B淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有B淋巴細(xì)胞中的抗體基因

B．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株

C．用紫外線(xiàn)照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過(guò)篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株

D．自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上

4．甲、乙兩圖表示從細(xì)菌細(xì)胞中獲取目的基因的兩種方法，以下說(shuō)法中錯(cuò)誤的是　　（　　　　）

A．甲方法可建立該細(xì)菌的基因組文庫(kù)

B．乙方法可建立該細(xì)菌的cDNA文庫(kù)

C．甲方法要以脫氧核苷酸為原料

D．乙方法需要逆轉(zhuǎn)錄酶參與

5．科學(xué)家將控制某藥物蛋白合成的基因轉(zhuǎn)移到白色萊航雞的受精卵DNA中，發(fā)育后的雌雞就能產(chǎn)出含該藥物蛋白的雞蛋，而且用這些雞蛋孵出的雌雞，仍能產(chǎn)出含該藥物蛋白的雞蛋。下列有關(guān)敘述正確的是　　（　　　　）

A．表達(dá)載體的導(dǎo)入運(yùn)用了顯微注射技術(shù)

B．受精卵的發(fā)育需要運(yùn)用胚胎移植技術(shù)

C．這種變異屬于不定向的變異

D．這種變異來(lái)源于染色體變異

6．科學(xué)家在某種農(nóng)桿菌中找到了抗枯萎的基因，并以質(zhì)粒為運(yùn)載體，采用轉(zhuǎn)基因方法培育出了抗枯萎病的金花茶新品種。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是　　（　　　　）

A．質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體之一，質(zhì)粒的存在與否對(duì)宿主細(xì)胞生存有決定性的作用

B．通過(guò)該方法獲得的抗枯萎病金花茶，將來(lái)產(chǎn)生的花粉中不一定含有抗病基因

C．該種抗枯萎病基因之所以能在金花茶細(xì)胞中表達(dá)，是因?yàn)閮烧叩腄NA結(jié)構(gòu)相同

D．為保證金花茶植株抗枯萎病，只能以受精卵細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞

7．（雙選）下列關(guān)于限制酶的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是　　（　　　　）

A．限制酶廣泛存在于各種生物中，微生物中很少分布

B．自然界中限制酶的天然作用是用來(lái)提取目的基因

C．不同的限制酶切割DNA的切點(diǎn)不同

D．一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列

8．（雙選）科學(xué)家在某種植物中找到了抗枯萎病的基因，并以質(zhì)粒為運(yùn)載體，采用轉(zhuǎn)基因方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是

A．質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體之一，不需人工改造就可直接應(yīng)用于基因工程

B．在培養(yǎng)過(guò)程中需要采用PCR技術(shù)

C．檢測(cè)抗枯萎病的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)，可采用抗病實(shí)驗(yàn)

D．為了保證金茶花植株抗枯萎病，只能以受精卵細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞

9．請(qǐng)分析回答下列有關(guān)現(xiàn)代生物科技方面的問(wèn)題：

（1）糖尿病在現(xiàn)代社會(huì)中的發(fā)病率越來(lái)越高，主要是由于患者胰島B細(xì)胞受損，胰島素分泌不足引起的。對(duì)此，某同學(xué)根據(jù)所學(xué)知識(shí)提出了用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)胰島素治療方法。基本程序：①獲取目的基因→②基因表達(dá)載體的構(gòu)建→③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→④目的基因的檢測(cè)與鑒定。其中①和②的操作中需要相同的工具酶是          ，該酶的作用是識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定          ，并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的          斷裂，暴露出相同的黏性末端。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在          的作用下延伸形成DNA。

（2）蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸的序列→找到相對(duì)應(yīng)的          序列。

10．1957年，生物學(xué)家了解到，病毒感染的細(xì)胞能產(chǎn)生一種因子，這種因子能作用于其他細(xì)胞，干擾病毒的復(fù)制，故將其命名為干擾素；從1987年開(kāi)始，用基因工程方法生產(chǎn)的干擾素進(jìn)入了工業(yè)化生產(chǎn)，并且大量投放市場(chǎng)。

（1）若已知干擾素的氨基酸序列，則獲取目的基因的較簡(jiǎn)單方法是          ；目的基因還可以從          文庫(kù)獲取，而從cDNA文庫(kù)中不一定能得到，原因是          。

（2）用限制酶處理質(zhì)粒和目的基因后，用          酶處理，可形成基因表達(dá)載體，該載體的化學(xué)本質(zhì)是          ；基因表達(dá)載體除含有干擾素基因外，還必須有          、          和________等。

（3）若選擇大腸桿菌作為受體細(xì)胞，常用的轉(zhuǎn)化方法是用          處理，使其成為          ，并在一定溫度作用下完成          。

（4）轉(zhuǎn)基因技術(shù)是否成功，需要對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行分子水平的檢測(cè)，首先是檢測(cè)受體細(xì)胞        上是否插入了目的基因，這是目的基因能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。檢測(cè)方法是采用          。最后還要檢測(cè)目的基因是否翻譯成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)，利用的技術(shù)是          。

11．正常蠶豆、豌豆和水稻均為二倍體，它們體細(xì)胞中的染色體數(shù)依次為12、14、24，這三種植物常作為生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。

（1）培育多倍體要用到秋水仙素，為觀察其作用，最好采用上述三種材料中的          作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是          。

（2）用32P標(biāo)記蠶豆體細(xì)胞（含12條染色體）的DNA雙鏈，再將這些細(xì)胞轉(zhuǎn)入不含32P的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在第二次細(xì)胞分裂的后期，一個(gè)細(xì)胞中被32P標(biāo)記的染色體條數(shù)和未被標(biāo)記的染色體條數(shù)比為          。

（3）正常的豌豆種子缺乏糯性。有人做了實(shí)驗(yàn)：選取健壯開(kāi)花的豌豆進(jìn)行人工除雄授予糯性水稻的花粉，結(jié)果沒(méi)有獲取正常的豌豆種子，你認(rèn)為最可能的原因是          。

（4）為從根本上解決水稻中的高植酸問(wèn)題，可將植酸酶基因?qū)�入水稻，培育低植酸轉(zhuǎn)基因水稻品種。下圖是獲取植酸酶基因的流程。

據(jù)圖回答：

①圖中基因組文庫(kù)          （填“小于”、“等于”或“大于”）cDNA文庫(kù)。②B過(guò)程需要的酶是          ；A、C過(guò)程中          （填“可以”或“不可以”）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構(gòu)建的文庫(kù)中分離外，還可以分別利用圖中          和          為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該過(guò)程中所用酶的顯著特點(diǎn)是          。

（5）生產(chǎn)上常將轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合種植，其目的是降低害蟲(chóng)種群中的          基因頻率的增長(zhǎng)速率。

12．2009年10月，我國(guó)自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)水稻“華恢1號(hào)”獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的安全證書(shū)。下圖表示該抗蟲(chóng)水稻主要培育流程，據(jù)圖回答：

（1）④過(guò)程應(yīng)用的主要生物技術(shù)是          。

（2）組建理想的載體需要對(duì)天然的質(zhì)粒進(jìn)行改造。下圖是天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖（部分基因及部分限制性?xún)?nèi)切酶作用位點(diǎn)），據(jù)圖分析：

①人工改造時(shí)，要使抗蟲(chóng)基因表達(dá)，還應(yīng)插入          。

②人工改造時(shí)用限制酶Ⅱ處理，其目的是：第一，去除質(zhì)粒上的          基因，保證T－DNA進(jìn)入水稻細(xì)胞后不會(huì)引起細(xì)胞的無(wú)限分裂和生長(zhǎng)；第二，使質(zhì)粒帶有單一限制酶作用位點(diǎn)，有利于          。第三，使質(zhì)粒大小合適，可以提高轉(zhuǎn)化效率等。

③若用限制酶Ⅰ分別切割改造過(guò)的理想質(zhì)粒和帶有抗蟲(chóng)基因的DNA分子，并構(gòu)成重組Ti質(zhì)粒。分別以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)已成功導(dǎo)入抗蟲(chóng)基因的水稻胚細(xì)胞，觀察到的細(xì)胞生長(zhǎng)的現(xiàn)象是在含          能夠生長(zhǎng)，而在含          中能生長(zhǎng)。 

三、答案及解析

1． D　解析：基因工程中目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶；人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性，只有經(jīng)過(guò)一定的物質(zhì)激活以后，才有生物活性。載體上的抗性基因主要是有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞，不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。所以D錯(cuò)誤。

2．D　解析：細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)入棉花體內(nèi)，在棉花的葉肉細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白，使棉花具有抗蟲(chóng)能力；人酪氨酸酶基因可在正常人的皮膚細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生酪氨酸酶，酪氨酸酶催化酪氨酸轉(zhuǎn)化為黑色素；動(dòng)物胰島素基因可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)移到大腸桿菌體內(nèi)，在大腸桿菌工程菌細(xì)胞中合成動(dòng)物胰島素；兔屬于哺乳動(dòng)物，其成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核和眾多細(xì)胞器，所以不可能表達(dá)出血紅蛋白。

3． B　解析：基因工程是在生物體外，通過(guò)對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類(lèi)所需要的基因產(chǎn)物。所以B為基因工程，而A為動(dòng)物細(xì)胞工程，C為誘變育種，D無(wú)人為因素不屬于基因工程。

4．C　解析：首先要知道甲圖描述的為該細(xì)菌的基因組文庫(kù)，只要利用DNA限制性核酸內(nèi)切酶將其原有的DNA切斷即可，不需要以脫氧核苷酸為原料。乙圖描述的為細(xì)菌的部分基因文庫(kù)。乙方法需要逆轉(zhuǎn)錄酶參與，并需要以脫氧核苷酸為原料。

5．A解析：本題考查將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法及基因工程的實(shí)質(zhì)。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞（受精卵）的方法是顯微注射法，運(yùn)用顯微注射技術(shù)；注射了目的基因的受精卵要移植到雌性動(dòng)物的輸卵管或子宮內(nèi)發(fā)育，移植的是受精卵不是胚胎，因此不需要胚胎移植技術(shù)；這種變異屬于定向變異；這種變異來(lái)源于基因重組。

6．B解析：質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中能夠友好借居，但是不能對(duì)宿主細(xì)胞的生存起決定作用。由于在轉(zhuǎn)基因植物體內(nèi)基因只存在于某一染色體上，所以在減數(shù)分裂形成配子時(shí)隨著同源染色體的分離，部分配子存在目的基因，而另外一半配子不含目的基因。抗枯萎病基因之所以能在金花茶細(xì)胞中表達(dá)，是因?yàn)閮烧吖灿靡惶酌艽a子。轉(zhuǎn)基因植物的受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是其他體細(xì)胞。

7．AB　解析：限制酶主要存在于各種微生物中，而高等生物中則很少。自然界中的限制酶主要用來(lái)切割外來(lái)的DNA，進(jìn)行自我保護(hù)。

8．BC　解析：基因工程中使用的質(zhì)粒載體都已不是原來(lái)細(xì)菌或細(xì)胞中天然存在的質(zhì)粒，而是經(jīng)過(guò)人工改造的。檢測(cè)抗枯萎病的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)，需要做抗病實(shí)驗(yàn)。作為基因工程的受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是植物體細(xì)胞。

9．（1）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）　　核苷酸序列　　磷酸二酯鍵　　DNA聚合酶（2）脫氧核苷酸

解析：①和②的操作中都需要用到同一種限制酶；限制酶的作用是識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。DNA模板與引物結(jié)合后，在DNA聚合酶的作用下，溫度控制在72°C左右，以四種脫氧核苷酸為原料，以靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式和半保留復(fù)制的原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核糖核苷酸序列（DNA）。

10．（1）人工合成法　　基因組　　cDNA是由生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的（其他合理答案也可）（2）DNA連接　　DNA　　啟動(dòng)子　　終止子　　標(biāo)記基因 （3）Ca2+　　感受態(tài)細(xì)胞　　轉(zhuǎn)化　（4）染色體DNA　　DNA分子雜交技術(shù)　　抗原—抗體雜交技術(shù)

解析：（1）若已知干擾素的氨基酸序列，則可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因；cDNA文庫(kù)是部分基因文庫(kù)，因?yàn)閏DNA是由生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的，因此目的基因可以從基因組文庫(kù)中獲取。（2）用限制酶處理載體和目的基因后，將目的基因與載體連接，需要使用DNA連接酶處理，基因與載體的化學(xué)本質(zhì)是相同的，都是DNA；干擾素基因是目的基因，此外，載體還要有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等。（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱(chēng)為轉(zhuǎn)化。（4）檢測(cè)目的基因使用DNA分子雜交技術(shù)；檢測(cè)蛋白質(zhì)采用的是抗原—抗體雜交技術(shù)。

11．（1）蠶豆　　蠶豆體細(xì)胞中染色體數(shù)目少，便于觀察（2）1：1（3）生殖隔離（4）①大于　　②逆轉(zhuǎn)錄酶　　可以　　③DNA　　cDNA　　耐高溫　（5）抗性

解析：該題考查秋水仙素誘導(dǎo)細(xì)胞中染色體加倍、DNA半保留復(fù)制、豌豆的人工雜交實(shí)驗(yàn)、基因工程的工具及步驟。蠶豆體細(xì)胞中染色體數(shù)目少，染色體比較大，容易觀察染色體變異情況。豌豆與水稻屬于不同物種，兩個(gè)物種間存在生殖隔離，存在授粉隔離。基因組文庫(kù)大于部分基因文庫(kù)。B是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，該過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶參與催化。PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA需要耐熱的DNA聚合酶參與催化。本題難度中等。

12．（1）植物組織培養(yǎng)　（2）①啟動(dòng)子　　②tet和tmr　目的基因（或外源DNA）準(zhǔn)確插入　　③卡那霉素的培養(yǎng)基　四環(huán)素的培養(yǎng)基

解析：（1）④過(guò)程表示植物細(xì)胞組織培養(yǎng)成植物體。（2）①基因表達(dá)載體應(yīng)含有啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因。②從圖看出限制酶Ⅱ能破壞tet和tmr。③由圖看出限制酶Ⅱ已將四環(huán)素抗性基因破壞。